鹽析法純化免疫球蛋白技術(shù)分析
鹽析法純化免疫球蛋白技術(shù)分析
(一) 原理
蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度輪狀病毒Elisa試劑盒是由蛋白質(zhì)周圍親水基團(tuán)與水形成水化膜的程度，以及蛋白質(zhì)分子帶有電荷的情況決定的。當(dāng)用中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液，中性鹽對(duì)水分子的親和力大于蛋白質(zhì)，于是蛋白質(zhì)分子周圍的水化膜層減弱乃至消失。同時(shí)，中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液后，由于離子強(qiáng)度發(fā)生改變，蛋白質(zhì)表面電荷大量被中和，更加導(dǎo)致蛋白溶解度降低，使蛋白質(zhì)分子之間聚集而沉淀。
(二) 鹽析的操作步驟
輪狀病毒Elisa試劑盒取正常人混合血清加等量生理鹽水，于攪拌下逐滴加入與
稀釋血清等量的飽和硫酸銨
(三) 主要材料
1. 試劑:
(1) 正常人混合血清；滅菌生理鹽水。
(2) 飽和硫酸銨溶液的配制:
稱(NH4)2SO4(AR)400～425克，以50～80℃之蒸餾水500ml溶解，攪拌20分鐘，趁熱過(guò)濾。冷卻后以濃氨水(15N NH4OH)調(diào)PH至7.4。配制好的飽和硫酸銨，瓶底應(yīng)有結(jié)晶析出。
(3) 萘氏試劑配制：
稱HgI11.5克，KI8克，加蒸餾水至50ml，攪拌溶解后，再加入20％NaOH 50ml。
(4) 0.02M, PH7.4磷酸鹽緩沖鹽液(Phosphate Buffered Saline PBS)配制:
貯存液:
A液：0.2M Na2HPO4：Na2HPO4·12H2O 71.64克，加蒸餾水至1000ml；
B液: 0.2M NaH2P4：NaH2P4·2H２O 3.12克，加蒸餾水至1000ml；
應(yīng)用液：取A液81ml加B液19ml混合，再以生理鹽水作10倍稀釋即成。
(5) 0.1M, PH7.4磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffer PB)配制:
將上述A液取81ml與B液19ml混合，再以蒸餾水對(duì)倍稀釋即成。
(6) 20％磺基水楊酸。
2. 器材:
輪狀病毒Elisa試劑盒普通冰箱、離心機(jī)、電磁攪拌器，751桮型紫外分光光度計(jì)、扭力天平，粗天平。
透析袋、尼龍繩、細(xì)竹棒、精密PH試紙(PH5.5～9.0)、眼科鑷子、小剪刀。
燒杯、量筒、吸管、滴管、滅菌小瓶、試管等。
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