實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
乳腺癌細(xì)胞；MDA-MB-453 | 貼壁生長 | EY-X63220 |
?
細(xì)胞名稱 乳腺癌細(xì)胞；MDA-MB-453
形態(tài)特性: 上皮樣；多角形
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細(xì)胞系由CailleauR在1976年從一名48歲的患有轉(zhuǎn)移性乳腺癌的白人女性的心包滲出液中分離建立的。該細(xì)胞表達(dá)FGF的受體。
培養(yǎng)條件: L15:LeibovitzMedium10%FBS
傳代方法: 1:2~1:6傳代；每周2~3次。
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法（-）
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
ELISA Kit
人EB病轉(zhuǎn)化的B拉丁屬名: Bacillus subtilis2-溴-3'-羥基苯乙酮Human PRKAR1B ELISA Kit
EB病轉(zhuǎn)化的人B淋巴拉丁屬名: Debaryomyces hansenii(R)-(-)-3-羥基丁酸乙酯Human PRDM15(PR domain zinc finger protein 15) ELISA Kit
人組織淋巴瘤拉丁屬名: Bacillus sp.(R)-(-)-3-羥基丁酸乙酯Human PRDM4 ELISA Kit
人慢粒白血病注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用3-環(huán)基-3-氧代酸乙酯Human PRKD2 ELISA Kit
人急性白血病注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用3-環(huán)基-3-氧代酸乙酯Human PREB ELISA Kit
非Hodgkin淋巴瘤注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用4-溴苯異酸酯Human PRKCDBP ELISA Kit
人急性髓白血病拉丁屬名: Penicillium chrysogenum4-溴苯異酸酯Human PRKAR2B ELISA Kit
人慢性髓原白血病拉丁屬名: Bacillus cereus1,2-二溴-4,5-二甲苯Human LALBA(Alpha-lactalbumin) ELISA Kit
人前B淋巴母瘤用途: 研究乙烯-醋酸乙烯共聚物Human PRELID1 ELISA Kit
前B淋巴注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用甲基烯酸芐基酯Human DHH(Desert hedgehog protein) ELISA Kit
人結(jié)腸癌耐耐藥株拉丁屬名: Brevibacterium sp.甲基烯酸芐基酯Human PPP4R2 ELISA Kit
中國倉鼠卵巢拉丁屬名: Cystofilobasidium capitatum烯基磺酸Human PRKG2 ELISA Kit
男性正常系拉丁屬名: Bacteroides acidifaciens烯基磺酸Human PPPDE1 ELISA Kit
人肺成纖維拉丁屬名: faecalis烯基磺酸Human PPP6C ELISA Kit
人皮膚基底癌拉丁屬名: Bacillus subtilis4,4'-雙[二(3,5-二甲苯基)氨基]-4''-苯基三苯Human PPP4C ELISA Kit
鴨胚胎成纖維注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用原丁酸三乙酯Human PPP5C ELISA Kit
斑馬魚胚胎成纖維
乳腺癌細(xì)胞；MDA-MB-453小鼠骨鈣素/骨谷氨蛋白(OT/BGP)ELISA試劑盒ABAbELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠血管舒緩激肽(BK)ELISA試劑盒ABAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠銅藍(lán)蛋白(CP/CER)ELISA試劑盒ABCA1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠組胺(HIS)ELISA試劑盒ABM-AbELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠脂聯(lián)素(ADP)ELISA試劑盒ABPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠雌激素(E)ELISA試劑盒AC-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒ACA/CENPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠(cAMP)ELISA試劑盒ACACELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
點(diǎn)擊放大
