實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
肝癌細(xì)胞；CSQT-1 | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63949 |
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細(xì)胞名稱 肝癌細(xì)胞；CSQT-1
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開(kāi)。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況: C2
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 陰性
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
生育酚轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；NGAL-4F6形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣tocopherol
二氫黃醇4-還原酶檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；NGAL-3B5形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣DFR
煙草脆裂病檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；1A4形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Tobacco rattle virus
6-磷葡萄糖檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；3B5形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣6- glucose phosphate
6-磷果糖檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；NGAL-2D8形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣6- fructose phosphate
環(huán)斑病檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 胚腎細(xì)胞；HEK293-MAN1A1&A2&B1-TKO形態(tài)特性: 上皮樣Tobacco ringspot virus
南方菜豆花葉病檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；CRP2形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Southernbeanmosaicsobemovirus
南芥菜花葉病檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；6F20形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Arabis mosaic nepo virous
酪蛋白激酶3檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；1F38形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣casein kinase3
組蛋白H3.2檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；TS-IFNγ-13形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Histone H3.2
tubby蛋白檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 小鼠正常腎上皮細(xì)胞；MNREC/HL-044MurineNormalRenalEpithelialCells,MNREC/HL-044形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣tubby protein
組蛋白H2A檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；TS-CD4-38形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Histone H2A
磷脂酰甘油檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 小鼠正常胸腺上皮細(xì)胞；MNTEC/HL-045MurineNormalThymicEpithelialCells,MNTEC/HL-045形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣phosphatidyl glycerol
黃瓜花葉病檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 小鼠正常附睪上皮細(xì)胞；MNEEC/HL-046MurineNormalEpididymalEpithelialCells,MNEEC/HL-046形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Cucumber mosaic virus
ω-脂肪去飽和酶檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱正常結(jié)膜上皮細(xì)胞；HNCEC/HL-043HumanNormalConjunctivalEpithelialCells，HNCEC/HL-043形態(tài)特性: 上皮樣ω-fatty acid desaturases
ω-3脂肪去飽和正?？谇火つど掀ぜ?xì)胞；HNOEC/HL-047HumanNormalOralEpithelialCells,HNOEC/HL-047形態(tài)特性: 上皮樣ω-3fatty acid desaturases
單磷尿苷檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；1C3A形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Uridine monophosphate
肝癌細(xì)胞；CSQT-150-55-5英文名：Yohimban-16-carboxylic acid
英文別名：3,20-Yohimban-16-carboxylic acid
CAS登錄號(hào)：50-55-5
分子式：C33H40N2O9
分子量：608.27
分子結(jié)構(gòu)：
外觀：白色或淺黃褐色結(jié)晶性粉末
規(guī)格：20mg/支
純度：≥ 98%
用途：用于含量測(cè)定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。
提取來(lái)源：蘿芙木屬多種植物
溶解性：易溶于二、，能溶于、，稍溶于、、乙醇、、乙和檸檬的稀水溶液，難溶于水
熔點(diǎn)：264～265℃（分解）
旋光度：–123±3°（c﹦1％，chloroform）-117.7°()， -164°()或-168°(二甲基甲酰胺)
藥理藥效：是能神經(jīng)元阻斷性抗高血壓藥。本品通過(guò)耗竭周圍交感神經(jīng)末梢的，心、腦及其他組織中的兒茶酚胺和 5-羥色胺達(dá)到抗高血壓、減慢心率和抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用。作用于下丘腦部位產(chǎn)生鎮(zhèn)靜作用，但無(wú)致嗜睡和麻醉作用，不改變睡眠時(shí)腦電圖，可緩解高血壓病人焦慮、緊張和頭痛。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予低于臨床劑量的后，即出現(xiàn)瞳孔縮小、眼瞼松弛和下垂、體溫過(guò)低、胃腸道活動(dòng)加快等癥狀。
貯存條件： 4℃冷藏、密封、避光
有效期： 2年
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