實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
肝癌細(xì)胞；Li-7 | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63929 |
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細(xì)胞名稱 肝癌細(xì)胞；Li-7
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 人肝癌細(xì)胞株。這株細(xì)胞從裸鼠體外移植瘤中建立。
培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況: PN5
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 陰性
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
Anoctamin-1蛋白檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: Cas9穩(wěn)定表達(dá)
枸櫞酸奧芬那君;枸酸芬那君4E-BP1 (53H11) Rabbit mAb (PE Conjuga)輪環(huán)藤寧
β-半糖苷酶Notch1 (5B5) Rat mAb12-冠-4
脫落酸(標(biāo)準(zhǔn)品)TDP43 (G400) Antibody甲基硫代磺酸甲酯
脫落酸(高純)p70 S6 Kinase MCF7 Control Cell Extracts1,2,3,四氫-2-萘
脫落酸,S-誘抗素; 壯芽靈TDP43 (A260) Antibody3,5-二羥基甲
(1:3000)PSD95 (D27E11) XP® Rabbit mAb三銀
核糖核酸酶A(sigma)PSD95 (D27E11) XP® Rabbit mAb溴吡啶甲酸甲酯
S-4MLANA/MART-1 Antibody5-溴甲酯
(1:12000)Phospho-μ-Opioid Receptor (Ser375) Antibody伯吉斯試劑
蛋白酶K(進(jìn)分)Rabbit IgG Isotype Control (Alexa Fluor® 647 Conjuga)哌啶甲酸甲酯
蛋白酶K(Sigma)Phospho-Doublecortin (Ser334) Antibody3,5-二溴-羥基甲
胰凝蛋白酶抑制劑CMTM6 Antibody2-溴-5-羥基甲
亮抑蛋白酶肽(進(jìn)口)Phospho-DRP1 (Ser616) Antibody異甲酯
胃酶抑素A;抑肽素;抑制劑MeCP2 (D4F3) XP® Rabbit mAb二硫代酸二酯
巖藻糖；L-巖藻糖MeCP2 (D4F3) XP® Rabbit mAb1-氨基酮鹽酸鹽
果膠酶JMJD3 Antibody7-溴庚酸酯
β-(70萬(wàn)u/ml液體)HDAC1 (D5C6U) XP® Rabbit mAb7-氨基庚酸酯鹽酸鹽
β-(酶活5萬(wàn)粉末)HDAC1 (D5C6U) XP® Rabbit mAb(1S,2S)-1,2-二基二
DNA酶,脫氧核糖核酸酶ⅠPhospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2,5-二氟甲酸
高峰來(lái)源于米曲霉(4000U/g)1BB/CD137/TNFRSF9 (D2Z4Y) Rabbit mAb基*氧基硅烷
高峰來(lái)源于米曲霉(100U/mg )Phospho-FLT3 (Tyr591) Antibody2,2'-偶氮二異丁基脒
甘油-酸脫氫酶FLT3 (8F2) Rabbit mAb
Phospho-FLT3 (Tyr969) (C24D9) Rabbit mAb2-氟磺酰
DL-對(duì)氨酸Clusrin (D7N2K) XP® Rabbit mAb辛酸亞錫
延胡素酸氨基酯Clusrin (D7N2K) XP® Rabbit mAb肼(無(wú)水)
輔羧酶;羧化輔酶;焦酸硫素Ajuba (D4D8P) Rabbit mAb鹽酸丁脒
吲哚酸酯Phospho-FLT3 (Tyr589/591) (30D4) Rabbit mAb硫酸鹽
α-環(huán)糊精Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)哌-2-羧酸
氧化酶(XOD)Phospho-FLT3 (Tyr591) (54H1) Mouse mAb3,二甲酰
?；?L-氨基?；窹erilipin-1 (K117) Antibody2-氨基-N-(2--6-基)噻唑-5-甲酰
1:250eIF4G2/p97 (D1A10) Rabbit mAb2-氨基-5-溴噻唑
1:2500TrK (pan) (A7H6R) Rabbit mAb (Biotinylad)硝基咪唑
阿利多eIF4H (D85F2) XP® Rabbit mAb1-甲基-硝基咪唑
核糖核酸酶A(美侖)；RNase A;核糖核酸酶IeIF4H (D85F2) XP® Rabbit mAb5-溴噻唑
5‘-酸吡哆，一水Perilipin-1 (D418) Antibody2-咪唑
NADPH;還原輔酶Ⅱ四鈉鹽;(羅氏)Phospho-FGF Receptor (Tyr653/654) Antibody2-(三氟甲基)基
；RBE-Cas9-784形態(tài)特性: 上皮樣Calcium channel antibody
肝癌細(xì)胞；Li-7百蕊草素I40437-72-7中文別名：阿福豆苷；山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷；山柰酚-3-O-葡萄糖鼠李 糖苷
英文名：Kaempferol-3-O-glucorhamnoside
CAS登錄號(hào)：40437-72-7
分子式：C27H30O15
分子量：594.16
分子結(jié)構(gòu)：
規(guī)格：20mg/支
純度：≥ 98%
用途：用于含量測(cè)定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。
提取來(lái)源：檀香科多年生半寄生草本植物百蕊草Thesium chinense Turcz．的全草
藥理藥效：有抗菌消炎，清熱解等作用。
貯存條件： 4℃冷藏、密封、避光
有效期： 2年
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